层析柱如何来选择，玻璃层析柱与和加压层析柱的优缺点各是什么

好一点小编带来了层析柱如何来选择，玻璃层析柱与和加压层析柱的优缺点各是什么，希望能对大家有所帮助，一起来看看吧！

层析柱如何来选择，玻璃层析柱与和加压层析柱的优缺点各是什么

层析柱是凝胶层析技术中的主体，我们研究所用的就是同兴玻璃仪器，一般用玻璃管或有机玻璃管。根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，从而分离的一种层析法。
层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外，
直径加大，洗脱液体体积增大，样品稀释度大。
玻璃层析柱，开口大，加料快，不需要其他仪器的配合，上方可以做成标准口与其他的标口玻璃仪器相接，但有不容易测量，筛网下方容易残留很多液体，层析速度较慢，不准确的特点，一般用于对精度要求没有那么高的实验，
加压层析柱，两端一般使用4F材料，耐腐蚀，酸碱性的耐度也可以，中段有玻璃材料的，也有有机玻璃材料的，需要与蠕动泵相结合，加快层析速度，用泵将料打进，如果没有泵则使用比较麻烦。现在一般的实验室都是使用加压的层析柱，taobao上有*的。

什么是氨基酸的离子交换

离子交换层析 (ion exchange chromatography，简称ICE)是分析和制备样品混合物的液-固相层析方法，是基于待测物质的阳离子或阴离子和相对应的离子交换剂间的静电结合，即根据物质的酸碱性、极性等差异，通过离子间的吸附和脱吸附原理将电解质溶液各组分分开。它是从复杂混合物体系中分离性质极为相似的生物分子的有效手段之一。由于带电荷不同的各种物质对离子交换剂有不同亲和力，通过改变洗脱液的离子强度和pH值，控制这种亲和力，即可使这些物质依据亲和力大小顺序依次从层析柱中洗脱下来。
氨基酸是两性电解质，分子 上的净电荷取决于氨基酸的等电点和溶液的pH值，各种氨基酸分子结构不同，在同一pH值时所带电荷的性质(正、负)和多少不同，与离子交换树脂的亲和力有差异，因此可根据亲和力从小到大的顺序被洗脱液分别洗脱下来，达到分离的效果。
三、仪器与试剂
(一)实验器材
(1)玻璃层析柱
(2)试管
(3)移液管
(4)恒压洗脱瓶
(5)部分收集器
(6)水浴锅
(7)分光光度计
(8)电炉
(二)材料与试剂
(1)苯乙烯磺酸钠型树脂(100~200目)
(2)2mol/L盐酸溶液
(3)2mol/L氢氧化钠溶液
(4)标准氨基酸溶液：将天门冬氨酸和赖氨酸分别配成2mg/mL的0.1mol/L盐酸溶液。
(5)混合氨基酸溶液：将上述天门冬氨酸和赖氨酸溶液按1：4比例混合。
(6)柠檬酸-氢氧化钠-盐酸溶液(pH5.8，钠离子浓度0.45mol/L)：取柠檬酸14.25克、氢氧化钠9.30克分别溶于水后混合，加入浓盐酸5.25毫升，定容至500毫升;4℃冰箱保存。
(7)显色剂：2克水合茚三酮溶于95%乙醇中，加水至100毫升。

层析柱没有装柱器怎么办

层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱正常的使用前提是正确的安装，其安装步骤包括：
1.检测层析柱的各个部件，确保干净、完整，拧上下端堵头，拧紧膨胀圈，然后将层析柱垂直固定在铁架台上。
2.将装柱器安装在层析柱上端。
3.往层析柱中加入适量的20%乙醇，打开下端口，重力流，排除下筛网中滞留的气泡，在液面低至1-2cm高度时关闭层析柱下端出口。
装柱
1.用玻璃棒紧靠柱子内壁引流，将摇匀的介质加入到层析柱中，这可以减少气泡的产生。迅速用20%乙醇填满柱子和装柱器，装上装柱器盖子，连接到?KTA上。
2.打开层析柱下端，开始以30cm/h流速装柱，直至柱床界面平稳。停止装柱。
3.打开装柱器盖子，用虹吸法去除界面上端的液体，去掉装柱器，然后小心的用20%乙醇封满柱子剩余部分。
4.将上端转接头一端连上?KTA，打开机器，以装柱流速用装柱液排出转接头管路中及筛板中残留的气泡，然后将转接头另一端装到层析柱上，使转接头下端刚好接触胶界面。(装柱流速约为70-100%的大流速）
5.拧紧膨胀圈，继续用装柱流速压柱，至少保持3个柱体积，以界面不变为主，在界面处做上记号。
6.关闭泵，并关闭柱子下端出口，使层析柱上端和泵断开（转接器上接口是打开的），略拧松膨胀圈，缓慢向下转动调节杆，到记号处停止，然后再拧紧膨胀圈，关闭上接口。
7.后检测层析柱柱效，确认完成安装。

离子交换法提取的谷氨酸怎么结晶呢？

离子交换法提取谷氨酸是利用离子交换树脂对发酵液中谷氨酸与其它同性离子吸附能力的差别 将这些离子选择性地吸附到树脂上 然后用洗脱剂先后洗脱 从而得到谷氨酸
谷氨酸是一种两性电解质 其等电点 为pH3.22.当pH^3.2时 谷氨酸带正电荷 呈阳离子状态 它能被阳离子交换树脂交换吸附
三 仪器与试剂（一）实验器材 （1）玻璃层析柱 （2）试管 （3）移液管 （4）恒压洗脱瓶 （5）部分收集器 （6）水浴锅 （7）分光光度计 （8）电炉
（二）材料与试剂（1）苯乙烯磺酸钠型树脂（100～200目）（2）2mo1/L盐酸溶液（3）2mo1/L氢氧化钠溶液（4）标准氨基酸溶液 将天门冬氨酸和赖氨酸分别配成2mg/mL的0.1m1/L盐酸溶液（5）显色剂。2克水茚三酮溶于95%乙醇中 加水至100毫升
四 操作步骤
（1）树脂的准备 树脂过夜㓎泡 使树脂膨胀 加2mo1/L NaOH至上述树脂中搅拌2号倾弃碱液 用蒸馏水洗涤至中性 加25m1 12mo1/L HC1搅拌2h 倾弃酸液 用蒸馏水充洗涤树脂至中性
（2）层析柱的准备 将强酸性阳离子交换树脂用HC1处理成H*型后洗至中性 搅拌1小时后装入层析柱 使之自然降沉到一定高度
（3）加样分离 将液面缓慢放至贴近层析柱表面 由柱上端仔细加入pH4.5的发酵液离心液3毫升 同时开始收集流出液 每管收集1毫升 测量收集液pH 洗脱液加入速度控制在0.5m1/mim 当样品液弯月面靠近树脂顶端时 立即加入发酵液 如此重复 不断测量收集液的PH值 直至树脂吸附饱和
（4）洗脱 加样完毕后 用滴管小心注入60·C4%（或2%）氢氧化钠溶液（切勿搅动床面）用试管收集洗脱液 每管收集1毫升 同时测量收集液pH 直至收集液

国家规定动物源性食品中呋喃唑酮的检出限为不得检出，但现在很多食品中都能检测出来。三方圆能测吗。？

能，动物源食品中呋喃唑酮残留检测方法 —高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了动物源食品中呋喃唑酮残留量的检测的制样和高效液相色谱测定方法。 本标准适用于鸡的肌肉、肝脏、肾脏组织和鱼肉中呋喃唑酮残留量检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件
，其最新版本适用于本标准。 GB/T1.1-20001标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则（IS0/IEC Directives，Part 3，1997，Rules for the structure and drafting of International Standards，NEQ） GB/T 6682—1992 分析实验室用水规格
他家的卡=有农业部备案，质量很OK

多氯联苯 (Polychlorinated Biphenyls)

85.2.5.1 多氯联苯的气相色谱-质谱法 (GC-MS) 测定

方法提要

多氯联苯易溶于正己烷、丙酮等有机溶剂，用正己烷-丙酮(1 + 1) 混合溶剂采用微波萃取或索氏抽提或加速溶剂萃取等方式提取土壤试样中的多氯联苯，提取液经浓硫酸、高锰酸钾净化除去类酯化合物和部分有机氯农药等干扰物后，浓缩定容，GC-MS 测定。

方法适用于土壤、沉积物等固体试样中 PCB28，PCB52，PCB101，PCB118，PCB153，PCB138，PCB180，PCB209 8 种多氯联苯单体的测定。当取样量为 10.00g 时，检出限为1.00μg / kg。

仪器与装置

气相色谱(质谱)仪配电子轰击源(EI)。

微波萃取消解仪配聚四氟乙烯微波萃取罐。

快速溶剂萃取系统。

索氏抽提器、漩涡器。

微量注射器25μL，50μL，100μL，250μL，500μL，1000μL等。

弗罗里硅土小柱规格6mL，1g。

色谱柱DB-5MS60m×0.25mm;0.25μm膜厚。

试剂

溶剂丙酮、正己烷、环己烷、异辛烷，农残级或色谱纯。

浓硫酸。

高锰酸钾。

铜粉或铜片使用前活化，活化方法参见85.2.2.1试剂与材料部分。

多氯联苯混合标准溶液PCB28、PCB52、PCB101、PCB118、PCB153、PCB138、PCB180、PCB209，每种组分浓度约为140ng/mL，异辛烷介质。

替代物标准溶液2，4，5，6-四氯间二甲苯、PCB155(100μg/mL)。

内标混合溶液PCB112和PCB198溶液(100μg/mL)。

样品采集与保存

参见85.2.4.1中样品的采集与保存部分。

分析步骤

1)样品提取。

a.微波萃取。准确称取3.00g土壤试样于聚四氟乙烯微波萃取罐中，加入50μL浓度为1.0μg/mL的2，4，5，6-四氯间二甲苯、PCB155替代物标准，1.0g铜粉或铜片，混匀，静置一段时间，加入20mL正己烷-丙酮(1+1)混合溶剂，在功率1200W、温度115℃下萃取25min。待微波萃取罐温度恢复至室温后，将罐中萃取液过无水硫酸钠除水后转移至浓缩瓶中，正己烷洗涤萃取罐两次，合并萃取液，浓缩至1mL左右，待净化。

b.索氏抽提。称取10.00g土壤试样于100mL烧杯中，加入5.00g无水硫酸钠及50μL1.0μg/mL2，4，5，6-四氯间二甲苯、PCB155替代物标准，1.0g铜粉或铜片，混匀。转入滤纸筒中再移入索氏抽提器中。试样经80mL正己烷-与丙酮(1+1)混合溶剂浸泡过夜后在65～-70℃恒温水浴抽提8h。抽提液KD浓缩至约为1mL，待净化。

c.加速溶剂萃取。称取10.00试样、0.50g去活后的弗罗里硅土，混匀，放入11mL萃取池中，加入50μL1.0μg/mL的2，4，5，6-四氯间二甲苯、PCB155混合替代物标准，1.0g铜粉或铜片，混匀，静置一段时间后进行加速溶剂萃取。萃取条件:系统压力10.3MPa(1500psi)，提取温度100℃，提取试剂为正己烷-丙酮(1+1)混合溶剂，加热时间5min，静态时间5min，清洗体积为萃取池体积的60%，氮气吹扫90s，循环两次，浓缩提取液至约为1mL，待净化。

2)样品净化。

a.硫酸净化。在待净化的1mL提取液的离心比色管中加入5mL(1+1)硫酸，漩涡1min，静置分层后取出硫酸层放入另一比色管中。若试液颜色较深，需进行第二次或第三次净化直至有机相颜色为无色。合并硫酸相，加入1mL正己烷漩涡1min，静置后将正己烷取出，与前面正己烷相合并，待高锰酸钾净化。

b.高锰酸钾净化。将硫酸净化后的提取液(正己烷相)加入5mL50g/L高锰酸钾溶液，漩涡1min，静置分层后，将高锰酸钾相转移到另一试管中。正己烷层继续加5mL高锰酸钾溶液漩涡，静置后取出正己烷放另一洁净试管中。合并高锰酸钾溶液，加入1mL正己烷漩涡，静置分层后移出正己烷相并与前面正己烷相合并，接弗罗里硅土净化。

c.弗罗里硅土净化。将上述净化后的有机相移入事先用6mL乙醚-正己烷(6+94)混合溶液、10mL正己烷活化处理好的弗罗里硅土小柱(规格6mL，1g)，待溶液流至近干时用15mL乙醚-正己烷(6+94)混合溶液分4次淋洗，KD浓缩瓶承接淋洗液。氮气吹扫乙醚-正己烷淋洗液约为1mL，加入10μg/mL的PCB112和PCB198溶液内标混合溶液6μL并定容至1.0mL，GC-MS测定。

3)GC-MS分析条件。

色谱条件。进样口温度270℃;不分流进样，进样量1μL;载气为高纯氦;柱前压14×6895Pa。色谱升温程序，初温100℃保持1min，以30℃/min升至200℃保持1min，再5℃/min升至310℃，保持3min。

质谱条件。离子源EI，电离电位70eV，离子源温度220℃，接口温度280℃。定性分析采用全扫描方式，扫描质量范围50～400m/z;定量分析采用选择离子扫描(SIM)，各化合物特征离子见表85.24。

表85.24 定量和定性选择离子

4)校准曲线。由标准储备液逐级稀释配制成0.00ng/mL、3.50ng/mL、7.00ng/mL、14.0ng/mL、28.0ng/mL、42.0ng/mL、56.0ng/mL标准工作溶液系列。定容前加入50μL浓度为1.0μg/mL的2，4，5，6-四氯间二甲苯、PCB155替代物标准及6μL浓度为10.0μg/mLPCB112和PCB198内标混合溶液。在SIM检测方式下，以标准溶液中目标化合物的峰面积与内标的峰面积比对目标化合物的浓度作图，得到该目标化合物的定量校准曲线。校准曲线的线性相关系数必须满足R2≥0.995以上。

5)定性及定量分析。

定性分析:参见85.2.1定性分析部分。

定量分析:内标法定量，参见85.2.1定量分析部分。

对含量接近检出限水平的试样，可以采用与其浓度相近的标准单点校准。对于含量超过校准曲线上限的试样，应减小取样量或稀释后重测，使其峰面积保持在校准曲线的线性范围内。

6)方法性能指标。经GC-MS检测得到多氯联苯回收率为102%～128%，RSD(n=6)为7.4%～9.8%。表85.25为取样量为10.00g时，GC-MS测定土壤试样中多氯联苯的方法性能指标，图85.9为GC-MS检测多氯联苯标准溶液选择离子总离子流色谱图。

表85.25 多氯联苯分析方法性能指标

7)多氯联苯标准溶液选择离子的总离子流色谱图。

8)质量控制。批量样品的质量控制及过程控制参见85.2.2有机氯农药分析方法。

替代物标准2，4，5，6-四氯间二甲苯回收率应在60%～130%，PCB155回收率应在70%～130%。

85.2.5.2 多氯联苯(总量)的气相色谱-质谱法测定

方法提要

多氯联苯较易溶于正己烷、丙酮等有机溶剂，采用正己烷-丙酮(1+1)混合有机溶剂经索氏抽提，或微波提取，或加速溶剂萃取提取土壤试样中的多氯联苯，提取液经浓硫酸、高锰酸钾净化除去类酯化合物、部分有机氯农药等干扰物后浓缩、定容，气相色谱-质谱检测。

方法适用于土壤、沉积物、固体废弃物等固体试样品中多氯联苯(总量)测定。当取样量为10g时，检出限为10μg/kg。

仪器与装置

气相色谱-质谱仪。

图85.9 多氯联苯选择离子的总离子流色谱图

微波萃取消解仪。

微量注射器10μL、25μL、50μL、100μL、250μL、500μL、2500μL等。

层析柱带聚四氟乙烯活塞的玻璃层析柱，规格25cm×1cm。

旋转蒸发仪。

氮吹仪。

弹性石英毛细管色谱柱DB-5MS，30.0m×0.25mm(i.d);0.25μm膜厚。

试剂与材料

空白土，取洁净土壤，自然风干、研磨过60目筛，正己烷抽提6h后，通风橱挥发去除溶剂，650℃下烘36h，转移至广口瓶中储存备用。

氯化钠、无水硫酸钠在600℃高温炉中烘烤4h，冷却后备用。

硫酸。

高锰酸钾。

丙酮、正己烷农残级或色谱纯。

铜箔使用前活化，活化方法参见85.2.2.1试剂与材料部分。

多氯联苯标样Aroclor1242(181μg/mL)、Aroclor1248(98.6μg/mL)、Aroclor1254(102.3μg/mL)、Aroclor1260(107.6μg/mL)，国家环境保护总局标准样品研究所。-18℃冰箱保存。

替代物标准2，4，5，6-四氯间二甲苯(Supelco公司)、PCB155(100μg/mL)。

内标PCB112和PCB198溶液(100μg/mL)。

样品的采集与保存

参见85.2.4.1中样品的采集与保存部分。

分析步骤

1)样品提取。参见85.2.5.1实验方法部分。

2)样品净化。参见85.2.5.1实验方法部分。

3)标准系列的配制。由Aroclor1242、Aroclor1248、Aroclor1254、Aroclor12604种多氯联苯工业品标准配成浓度各为4μg/mL的多氯联苯混合标准溶液，再逐级稀释配成0.0ng/mL、40ng/mL、200ng/mL、800ng/mL、1200ng/mL、1600ng/mL系列标准溶液，定容前加入替代物标准及内标，加入量同试样分析。

4)气相色谱-质谱分析条件。

色谱条件。进样口温度，270℃;氦气，1.0mL/min;不分流进样;进样体积1.0μL。柱前压14×6895Pa。程序升温，初始温度70℃，保持1min;以12℃/min升至200℃，保持2.00min;再以6℃/min升至290℃，保持5min。

质谱条件。离子源温度，220℃;传输线温度，280℃;质谱扫描条件，溶剂延迟9.5min，选择离子扫描模式，多氯联苯的特征离子见表85.26。替代物标准、内标特征离子参见前方法。

表85.26 多氯联苯检测的特征离子

5)定性及定量分析。

a.定性分析。将试样待测物保留时间、扣除本底空白的质谱图与预期标准目标物的保留时间、质谱图相比较并结合随机谱库进行定性分析。试样分析时间与标准分析时间相差不得超过12h。

在仪器状态稳定的条件下，定性的确证必须满足试样待测目标物保留时间应在标准目标物保留时间的±0.06min之内，且标准质谱图中特征离子必须出现在试样质谱图中，扣除背景后的试样中特征离子强度与标准质谱图中特征离子强度符合度偏差应在±20%之内。

b.定量分析。工业品多氯联苯混合物总量定量有多种方法。主要有图形法、系数法。图形法的主要原理是配制出与试样品具有相似色谱图形(或总离子流图)的一种或多种的多氯联苯混合标准溶液，并建立5个质量浓度水平的定量校准曲线，再根据试样色谱图(或总离子流色谱图)中各峰的峰高或峰面积总和计算出试样中多氯联苯。该方法适用于色谱图形能完全吻合的单一污染。系数法的主要原理是在相同的分析条件下，根据标准溶液色谱图(或总离子流色谱图)中各多氯联苯峰高(或峰面积)及其组分含量计算出各峰的相对灵敏度，再根据试样溶液色谱图(或总离子流色谱图)中各相应峰的峰高(或峰面积)计算出每个峰的浓度，最后以其总和作为多氯联苯浓度。系数法可用于各种试样中的多氯联苯，包括降解、未降解或被生物累积的多氯联苯。当然，各异构体在响应上的差异使得该法也存在着一定的误差。本法采用系数法定量。

定量方法为内标法。按已经确定的选择离子对多氯联苯标准进行扫描，得到选择离子的总离子流色谱图(图85.10)。再分别从选择离子的总离子流色谱图中依据各定量离子分别提取一氯联苯、二氯联苯、三氯联苯、四氯联苯、五氯联苯、六氯联苯、七氯联苯、八氯联苯、九氯联苯、十氯联苯的质量色谱图(图85.11)，分别将各氯代联苯的峰面积加和得到多氯联苯总面积，同时建立各氯代联苯定量校准曲线。

图85.10 多氯联苯工业品混合标准溶液选择离子总离子流色谱图

试样在相同的分析条件下测定。按上述方法提取各氯代联苯的峰面积，根据回归方程计算出样品中各氯代联苯的仪器测定浓度，最后加和得到多氯联苯仪器测定总浓度。再根据称样量和定容体积计算出试样中多氯联苯总量。

图85.11 选择离子的质量色谱图

6)方法性能指标。

线性范围，10.0～4000ng/mL;相关系数(R2)≥0.9990，试样基体加标回收率为92.2%～117%，相对标准偏差为9.36%(n=6)，见表85.27。当取样量为10.0g时，方法检出限为10.00μg/kg。

表85.27 不同添加水平下多氯联苯的回收率和精密度

小弟跪求在杜仲叶中提取并纯化绿原酸的具体方法，各位大侠救命啊！！！！

杜仲叶中绿原酸的提取纯化研究
摘要：目的研究杜仲叶中绿原酸的提取纯化方法。方法采用水提、絮凝脱色、树脂吸附、重结晶工艺提取纯化。结果杜仲叶的水浸提液浓缩后用1%壳聚糖絮凝去杂、活性碳脱色得到进样液，进样液用NKA-9树脂吸附，50%乙醇解吸，洗脱液浓缩后的粗品经甲醇重结晶得到纯度≥97%的绿原酸，提取率 ≥65%。结论 优化完善了杜仲叶中绿原酸的提取纯化方法，为杜仲资源的充分综合利用和产业化开发提供了参考。
关键词：绿原酸； 提取； 纯化； 杜仲叶
Study on the Extraction and Purification of Chlorogenic Acid in Eucommia ulmoides Oliv. Leaves
YUAN Hua, DENG Liang, YANG Xiao�jun, YAN Zhi�guo, WU Yuan�xin
(School of Chemical Engineering and Pharmacy, Wuhan Institute of Technology, Wuhan 430073, China)
Abstract：Objective To study the optimum extraction and purification process for chlorogenic acid in Eucommia ulmoides Oliv. Leaves. MethodsThe process was carried out by water extraction, 1% chitosan flocculation, actived char decolorization, NKA�9 resin adsorption, 50% ethanol desorption and methanol recrystallization. ResultsThe extracting ratio of chlorogenic acid was 68% with purity of 97%.ConclusionAn optimum and improved technology for the extraction and purification of chlorogenic acid in Eucommia ulmoides Oliv. Leaves was investigated. It is helpful to industrial production of chlorogenic acid.
Key words：Chlorogenic acid; Extraction; Purification; Eucommia ulmoides Oliv.

杜仲Eucommia ulmoides Oliv.是我国特有的经济树种，其药用价值历来受到人们关注。杜仲中主要有效成分绿原酸具有抗菌、抗病毒、利胆、保肝、降压、清除自由基等作用。 2000多年前我国的《神农本草经》就将之列为中药上品。近年来研究表明杜仲叶中的主要化学成分和杜仲皮基本一致，且杜仲叶中绿原酸含量更为丰富，达到干叶重的1%~5%，因此从原材料丰富且价廉的杜仲叶中提取绿原酸成为研究热点〔1～3〕。其中钱骅〔4〕、刘军海等〔5〕提出的大孔吸附树脂提取纯化法展示了一定的工业化前景，但报道的树脂分离效果不一致，且均未见有关终产品纯度及收率的报道。杜仲叶提取物中除含绿原酸外，还含有鞣质、蛋白质、多糖等物质。为了得到纯度较高的绿原酸，必须对提取液进行多步分离纯化。本文在文献工作的基础上，围绕产业化目标，改进完善了提取制备工艺，采用水提、絮凝脱色、树脂吸附、重结晶工艺提取制备了纯度与收率较高的绿原酸。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器杜仲叶采自湖北五峰（风干、粉碎）；主要试剂乙醇、甲醇、稀盐酸等均为分析纯；壳聚糖为生化试剂；NKA�9，AB�8，NKA�Ⅱ型树脂(南开大学化工厂)；绿原酸（中国药品生物制品检定所）。ZF�Ⅰ型紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）；Agilent 1100型高效液相色谱仪。
1.2 提取纯化工艺准确称取10.0 g杜仲叶，用去离子水2×120 ml在80℃下动态提取150 min，过滤,提取液减压浓缩至100 ml，浓缩液中加入1%壳聚糖溶液4 ml絮凝，过滤，滤液用活性碳脱色，得进样清液，用NKA�9树脂吸附进样清液，用50%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，得绿原酸粗品，经甲醇重结晶得绿原酸纯品。提取率≥65%（以杜仲叶中绿原酸含量计），纯度≥97%。
1.3 绿原酸的含量检测绿原酸的含量测定参照文献〔6，7〕进行。
2 结果
2.1 提取条件
2.1.1 提取溶剂的选择杜仲叶中绿原酸的提取一般选用40%乙醇水溶液，使用乙醇水溶液提取除增加溶剂成本以外，提取液中的脂溶性成分增加，造成后续处理困难，绿原酸在热水中溶解度较大，本文选用水为提取溶剂。
2.1.2 提取温度的选择随着提取温度的升高，绿原酸得率不断增加，当温度高于80℃时，绿原酸得率开始下降。随着温度的升高，杜仲叶中其它成分的溶出也不断增加，同时考虑到绿原酸的热不稳定性，提取温度控制在80℃以下。
2.1.3 提取时间的影响随着时间的延长，绿原酸得率逐渐升高，尤其是在50～150 min内，二者几乎呈现良好的线性关系，随后逐渐达到提取平衡状态。
2.1.4 浸提液pH值的影响在温度、料液比、提取时间一致的条件下，用稀盐酸调节提取溶剂的pH值，当pH值为4时，绿原酸得率较高。因此，绿原酸的最佳提取工艺条件为：每10.0 g杜仲叶，用2×120 ml去离子水在pH=4及温度80℃下动态提取150 min。
2.2 絮凝脱色传统中药提取工艺中常常采用水提醇沉法，目的是除去提取液中的淀粉、树胶、蛋白质、粘液质、果胶、多糖、无机盐等无效成分。实验发现，水提醇沉法中醇的浓度越高越有利于除去杂质，但有效成分由于醇沉包夹损失也随之增大。另外水提醇沉工艺还存在乙醇消耗量大、生产成本高、生产安全系数低等缺点，因此需要改进工艺。絮凝澄清法是在中药提取液或提取浓缩液中加入一种絮凝剂以吸附架桥及电中和方式除去溶液中的某些物质，以达到分离纯化的目的〔8〕。实验通过絮凝剂种类、浓度及絮凝温度、酸度的选择比较，确定优化的絮凝脱色工艺为：每100 ml浓缩液中加入1%壳聚糖溶液4 ml，搅拌，在60℃静置60 min，过滤，滤液用1g活性碳脱色，得进样清液。
2.3 大孔吸附树脂的选择结合杜仲叶浸提物的特性，本文对NKA-9，AB-8，NKA-Ⅱ3种极性的大孔吸附树脂进行选择比较。树脂根据文献〔4，5〕经预处理、再生后，进行静态吸附与解吸实验，3种不同型号的大孔吸附树脂对绿原酸溶液（4.8 mg·ml-1，10 ml）得到的吸附量、吸附率和解吸率如表1所示。
表1 3种树脂对绿原酸的吸附和解吸情况（略）
由表1知，3种大孔吸附树脂对绿原酸均具有较高的吸附量和吸附率，但是AB-8型树脂吸附的绿原酸很难被解吸下来，不宜用作分离绿原酸的树脂，只有NKA-9，NKA-Ⅱ型树脂较为适合。比较可知，NKA-9型树脂在静态吸附时具有较高的吸附量和吸附率，而且易解吸，对绿原酸具有较好的富集效果。
2.4 NKA-9树脂对绿原酸的吸附实验
2.4.1 动态吸附曲线将浓度为3.0 mg·ml-1的绿原酸溶液加入装有200gNKA-9型大孔树脂的玻璃层析柱中，在流速为2.0 ml·min-1时（可用BV/h表示，即每小时流过床层的流动相的体积为树脂床体积Bed Volume的倍数), 测定流出液中绿原酸的浓度，绘制吸附曲线（见图1）。结果表明，该树脂可处理7～8倍树脂床体积的进样液。
图1 NKA-9树脂对绿原酸的吸附曲线（略）
2.4.2 进样液流速对吸附的影响为了进行有效的吸附，在树脂吸附过程中有必要使固液两相有充分的接触时间。进样流速过大，树脂对绿原酸来不及吸附，导致吸附率下降；进样流速过小，虽然吸附较充分，但是吸附时间长，效率较低。将浓度为3.0 mg·ml-1的绿原酸溶液过柱，考察单位时间内树脂的吸附量与不同进样流速的关系，结果表明，在流速为2.0 ml·min-1时，吸附效果最好。见图2。
图2 进样液流速对吸附的影响 （略）
2.4.3 进样液pH值对吸附的影响在不同pH值下进行吸附实验, 结果表明，绿原酸作为多羟基酚酸，在酸性条件下易被吸附。因为在酸性条件下，绿原酸以分子形式存在，树脂对其吸附作用增强；在强酸条件下，以内酯形式存在的绿原酸容易水解；在碱性条件下，以离子形式存在的绿原酸则不易被吸附。由图3可知，pH值为3时，吸附效果最好。
2.5 NKA-9树脂对绿原酸的脱附实验
2.5.1 洗脱液的选择化合物经树脂吸附后，根据吸附力的强弱不同而选用不同的洗脱剂。一般来说，吸附剂与吸附质以分子间色散力作用时，吸附力较弱，易于洗脱；而当吸附剂与吸附质以偶极间作用力或氢键作用时，吸附力强，不易于洗脱。NKA-9大孔树脂极性较强，同时绿原酸是含有酚羟基化合物，容易与树脂形成氢键，对绿原酸洗脱需要用对它有更强的溶解能力的溶剂。本实验中选用不同浓度的乙醇水溶液作为洗脱剂，结果见图4所示。
图3 进样液pH值对吸附的影响（略）
图4 洗脱剂乙醇浓度与解吸率的关系（略）

实验中分别用不同浓度的乙醇溶液进行洗脱，测定洗脱液中绿原酸的含量并计算解吸率。其中50%和70%的乙醇溶液可将树脂吸附的绿原酸基本洗脱下来。对洗脱液进行薄层分析发现，70%的乙醇溶液解吸率虽然较高，但是洗脱液中杂质含量也较高，达不到有效成分分离的效果，所以实验中选择50%的乙醇溶液作为洗脱液。
2.5.2 洗脱曲线的绘制进样清液吸附后，采用50%乙醇溶液洗脱，洗脱流速控制为1.0BV/h，收集洗脱液并测定洗脱液中绿原酸含量，绘制其洗脱曲线如图5所示。
图5 NKA-9树脂的洗脱曲线（略）

可见，用3倍树脂床体积的洗脱剂基本上可将绿原酸洗脱下来，而且洗脱峰较集中。将50%的乙醇洗脱液减压浓缩，低温干燥后得到绿原酸的粗产品。
2.6. 重结晶绿原酸粗品用甲醇重结晶，真空干燥，得白色针状晶体。产物结构经IR，HNMR分析确证，HPLC测定含量97.91%。
3 结论
本研究优化了从杜仲叶中提取绿原酸的工艺条件：杜仲叶用去离子水在80℃浸提150 min，提取液经浓缩、絮凝除杂、吸附脱色得到进样清液，进样液经NKA-9大孔树脂处理得到绿原酸粗品，后者经重结晶得到含量≥97%的绿原酸，提取率 ≥65%。我国杜仲资源丰富，从杜仲叶中提取绿原酸的工艺条件优化研究为杜仲资源的充分综合利用和产业化开发提供了基础数据。
参考文献：
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〔3〕 陈晓娟，周春山，魏 巍.杜仲叶中绿原酸和黄酮不同提取方法的比较〔J〕.中国生化药物杂志，2006，27（1）：38.
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〔5〕 刘军海，裘爱泳.杜仲叶绿原酸提取纯化工艺的研究〔J〕.中药材，2004，27（12）：943.
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〔7〕 刘圣金，狄留庆，吴德康，等.高效液相色谱法测定杜仲中绿原酸的含量〔J〕.中国中医药信息杂志，2006，13（1）：44.
〔8〕 王龙虎，吴国良，程冀宇.壳聚糖及其衍生物在中药制药工业中的应用〔J〕.中国中药杂志，2004，29（4）：289.
(武汉工程大学化工与制药学院，湖北 武汉 430073)

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