好一点小编带来了现在常用的核酸染料有哪几种,希望能对大家有所帮助,一起来看看吧!
常用的核酸染料有:
1、EB染料
EB属于核酸分子嵌入剂,通常用于分子遗传学、DNA和染色质结构分析等研究中,特别是国内很多实验室仍在使用EB进行凝胶核酸电泳实验的染色。
EB是极易渗透细胞膜与胞内DNA嵌合的小分子,它具有平面共轭大环结构,是典型的DNA分子插入试剂,菲啶环插入到DNA分子的碱基对之间,与DNA嵌合形成稳定的复合物,并影响DNA
的复制,破坏正常的遗传生理现象。EB作为诱变性的化合物,它在人体中诱导突变的机制是不可逆转的。
2、GoldView染料
GoldView(GV)是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,也可用于RNA染色。
实质上,所谓的Goldview就是吖啶橙,也就是传说中的AO,有一种传统的细胞凋亡试验,采用的染料正是吖啶橙,也就是AO/EB染色试验,EB无法穿透完整的细胞膜,而AO可以穿过细胞膜染上细胞核,以此来区分凋亡和未凋亡的细胞。
3、GelRed 和 GelGreen染料
GelRed
和GelGreen
是两种集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染。
GelRed
和 GelGreen
的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞,正是这一特性降低了染料的细胞毒性。不过也正是因为如此,其价格大约是GoldView的十倍左右。
扩展资料
核酸染料的科研应用:
1、免疫分析
荧光标记的单克隆抗体技术为流式细胞仪在研究细胞膜和细胞内各种功能性抗原、肿瘤基因蛋白等领域扩展了无限的应用空间。
荧光探针可以通过蛋白质交联剂共价结合在单克隆抗体上。免疫荧光标记最常用的染料有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)、藻红蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等。
2、核酸检测
核酸荧光染料对细胞核染色后定量测量细胞所发出的荧光强度,就可以确定细胞核中DNA、RNA的含量,并可以对细胞周期和细胞的增殖状况进行分析。
有多种荧光染料可以对细胞中的DNA或RNA染色,常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 33342等,RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。
参考资料来源:百度百科-荧光染料
会。 核酸染色应用在许多DNA检测相关的技术领域,染色剂结合DNA会造成电泳迟滞,加多了也会影响电泳结果。核酸染料是一种灵敏、稳定和相对安全的荧光核酸染色试剂,是生物实验中不可或缺的一分子。
不会失效。
常用的核酸染料有:
1、EB(溴化乙锭)是高度灵敏的嵌入性芳香族荧光化合物,为强致癌诱变剂,但价格便宜,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的核酸。
2、GoldView I型/II型染料是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,也可用于RNA染色。
3、GelRed和GelGreen属于大分子产品,经过埃姆斯 AMS 和相关测试,结果表明,该染料的诱变性远小于溴化乙锭(EB),是两种集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。
4、SYBR Green 和SYBR Gold于1995 年由 Molecular probes 公司推出,是一种高灵敏的核酸染料,稳定性差。
1、EB(溴化乙锭)
溴化乙锭是一种高度灵敏的嵌入性荧光染色剂,为强致癌诱变剂,但价格便宜。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。EB的这种特性使其成为一种核酸染料,常用于琼脂糖凝胶电泳中的核酸染色。溴化乙锭在紫外区302nm和366nm处有吸收峰,在紫外光的照射下,溴化乙锭可被激发出橙红色的荧光(590nm)。结合有DNA的溴化乙锭复合物的荧光强度要比没有结合DNA的染料高出20-30倍,因此溴化乙锭可检测到少至10ng的DNA条带,非常灵敏。
2、Gel Green和Gel Red
由Biotium公司研发推出的EB替代染料,染色效果和EB差不多,在紫外下不容易淬灭,可以用于胶回收。但价格较贵。
GelRed 和 GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定性于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染。其特点有:
1)高灵敏度:GelRed 和 GelGreen 是目前市场中最灵敏的凝胶核酸染料之一;
2)稳定性极好:可以使用微波炉加热,可以在室温下保存;
3)更安全:艾姆斯氏试验结果表明,该染料的诱变性远小于溴化乙锭(EB);
4)广泛的适应性:适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色;
5)染色过程简单:与EB一样,在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解;而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗;
6)对 DNA 和 RNA 的迁移影响小:对核酸迁移的影响小于 SYBR Green I?;
7)与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容:使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时,GelRed 可以完美的替代EB;使用 254nm 激发的 UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时,GelGreen 足以替代任意一种 SYB染料。但该染料会使小片段DNA迁移慢一些(与EB相比).
3、绿色荧光核酸染料
绿色荧光核酸染料对于大片段DNA的染色效果良好,但是在对于500bp以下的片段效果不是很好,还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭,一般5-10min条带就会消失。另外绿色荧光核酸染料不适用于胶回收。
4、SYBR Green 和SYBR Gold
稳定性差,也有毒性。它属于花箐素类核酸染料,花箐类染料不是无毒的,而只是低毒的,电泳级别的是经过修饰的,修饰有三种:1.加入卤素或氰基。2.插入环羟基。3.加入稳定剂。SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单:无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍,用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低。SYBR Green和SYBR Gold相对于EB的稳定性要差很多。SYBR系列的染料也能进入细胞染色线粒体以及核内的DNA,从而产生危害。SYBR Green I已被证实在紫外光下将会产生强诱变能力,使DNA或其他物质发生突变。
几种核酸染料的比较
染料
安全性
稳定性
灵敏
优点
缺点
EB
--
+
++
廉价
强诱变剂
Gel Green
+
+
++
安全
价格高
绿色荧光核酸染料
-
-
+
大片段染色良好
易淬灭
SYBR Green
-
-
++
灵敏
稳定性差
做生化实验,电泳跑胶是经常要做的事情。会使用到EB这种物质,可能具有强致癌性。
百度后了解到,EB具有挥发性,可以弥散到空气中,对呼吸道产生危害。长期暴露在EB环境下的果蝇会畸形。还会渗入细胞膜。
所以各位实验儿保护好自己。接触EB带手套,记得不要碰别的地方。实验室有挥发性物质,记得通风。购*无毒的核酸染料。珍爱健康。
DNA染料:碘化丙啶(PI)、DAPI
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