求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤

好一点小编带来了求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤，希望能对大家有所帮助，一起来看看吧！

总RNA提取试剂盒步骤：
样品处理：
a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。
向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。

苯酚、异硫氰酸胍、8－羟基喹啉、β-巯基乙醇等。TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。
0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑*用。
异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，*白迅速与核酸分离。
β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。

北京艾德莱的植物RNA提取试剂盒非常好用!他们有好几款植物RNA提取的试剂盒。
现在给您好提供一些资料，希望能帮助到您;
(1)
首先有两种选择:第一是用他们的RN01
TRIpure
reagent，这个就是Invitrogen的TRIzol，他们的质量完全和进口一样可以100%替代进口TRIzol。
第二是用RN33
PLANTpure
通用植物总RNA快速提取试剂盒
(普通植物组织细胞),这个试剂盒的原理，是TRIzol加离心柱子，在TRIzol的基础上加了离心柱子，速度更快，纯度更高，操作更简单。等于是TRIpure(RN01)加离心柱子。
(2)
然后根据特殊具体需求比如想速度更快，操作更简单，还不想用TRIzol这种苯酚，氯仿毒性物质还有两种选择:一种选择是RN09
EASYspin植物RNA提取试剂盒，这个盒子和Qiagen的74904完全一样，不用苯酚，氯仿，速度最快，操作最简单。但是对部分植物样品来说，可能残留基因组DNA稍多，只有做了试验才知道客户的样品是不是残留DNA稍多，就是Qiagen也不能确保100%的样品没有残留DNA。北京艾德莱能确保的就是和Qiagen的效果一致。实在有DNA残留的，就可能还要用DNA酶消化。具体只能自己权衡选择或者和艾德莱技术人员沟通了再选择。另一种就是RN38
EASYspin
Plus植物RNA提取试剂盒这个试剂盒是RN09的改进版本(Qiagen也没有这款，是艾德莱在Qiagen基础上改进世界首创的)，它使用基因组清除柱子的技术和配方在保持RN09不用苯酚，氯仿毒性物质，最简单，最快速的基础上消除了基因组DNA残留，一般肉眼不可见DNA残留。注意:目前北京艾德莱测试的几种植物样品中均已经获得成功，使用RN09提取有残留DNA的样品种类使用这款后，均无DNA残留。
希望我的回答能帮助到您好。

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:

Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。

Trizol作用原理:

在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。

水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

扩展资料

与DNA不同，RNA一般为单链长分子，不形成双螺旋结构，但是很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。

RNA的碱基配对规则基本和DNA相同，不过除了A-U、G-C配对外，G-U也可以配对。

在细胞中，根据结构功能的不同，RNA主要分三类，即tRNA（转运RNA），rRNA（核糖体RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA是合成蛋白质的模板，内容按照细胞核中的DNA所转录；tRNA是mRNA上碱基序列（即遗传密码子）的识别者和氨基酸的转运者；rRNA是组成核糖体的组分，是蛋白质合成的工作场所。

参考资料来源：百度百科-RNA

哪种RNA抽提试剂盒比较好用
提取总RNA的方法现在主要的就是用商用试剂盒，还有就是用传统的酚氯仿，trizol提取，一般trizol提取的质量相对比较好，但是操作起来比较麻烦，全程冰上操作，包括离心，这要看你们实验室有没有相应的试剂或仪器了，如果用商用试剂盒的话，通常是针对比较特殊的要求的样本的，比如石蜡样本，植物样本等，你需要根据你的样本类型选择不同的试剂。

有人用天根的植物RNA提取试剂盒提取过RNA
提RNA一般注意：提取前材料的保存（新鲜材料,过夜处理的样品）,提取中对外源性的RNA酶的清除控制（离心管,PCR管,电泳槽,台面等的无RNA酶化处理）,提取后需要-80度保存.其次跑电泳时,注意电泳液最好用新鲜的,核酸染料等诸多因素.
细菌总RNA提取试剂盒（ germs islation kit).
对于外源性RNA酶的控制外源RNA酶清除剂,避免使用致癌物DEPC的危险方法就可简单操作清除耗材,台面,仪器等的外源RNA酶的降解作用.

博凌科为石蜡包埋组织RNA快速提取试剂盒（离心柱型）
一、原理简介

改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA 酶，然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free water将纯净RNA（microRNA）从硅基质膜上洗脱。

二、试剂盒特点
1． 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2． 结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3． 独有的MRL裂解液配方，可以有效的消除基因组污染。
4.

多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。

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